胸苷是抗艾滋病药物司他夫定(3′-脱氧-2′,3′-双脱氢胸苷)和叠氮胸苷的重要前体物质。应用代谢工程方法对大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)生物合成胸苷进行了研究。通过敲除E.coli BL21嘧啶回补途径的deo A、tdk和udp三个基因,BS03工程菌株能够积累21.6 mg/L胸苷。为了增加合成胸苷前体物核糖-5-磷酸和NADPH的供给,进一步敲除pgi和pyr L使工程菌BS05胸苷的产量提高到90.5 mg/L。而通过过表达胸苷合成途径的ush A、thy A、dut、ndk、nrd A和nrd B六个基因,菌株BS08胸苷的产量能达到272 mg/L。通过分批补料发酵,BS08最终可以积累1 248.8 mg/L的胸苷。本研究结果表明经过代谢工程改造的E.coli BL21具有良好的胸苷合成能力和应用潜力。
目的 探讨mRNA作为结核分支杆菌活菌检测标志的可行性。方法 采用定量聚合酶链反应 (PCR)方法测定结核分支杆菌H3 7RV 在利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星处理后 2 4、 4 8、 72h 85BmRNA表达水平的变化 ,并与活菌计数方法对比。结果 在异烟肼、利福平和链霉素处理 2 4h时 ,结核分支杆菌H3 7RV 活菌数下降明显 ;在异烟肼、链霉素、乙胺丁醇及氧氟沙星各药各浓度处理 72h时 ,活菌数相似 ,但利福平处理后活菌数较它们低。利福平处理 2 4h后 85BmRNA下降到无药对照的 0 0 2 % ,其他药物处理分别下降到无药对照的 1 %～ 1 0 % ;各药处理 72h后85BmRNA均下降到 1 %以下。结论 mRNA表达水平可以在短时间内反映出用药与无药的区别 ,并与菌落形成单位 (cfu)几乎呈平行关系。mRNA是检测和判定结核分支杆菌“死”“活”的分子标志物
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