以N-糖基化提高毕赤酵母重组表达β-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS-P）的热稳定性为目的,在PGUS-P模拟结构分析的基础上,半理性方法设计并通过定点突变引入具有EAS（enhanced aromatic sequence）序列特征的新N-糖基化位点,经毕赤酵母重组表达后,获得了3个新糖基化的突变酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259。反应动力学分析表明,与原始PGUS-P相比,突变酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259催化甘草酸水解的Km变小,Kcat/Km增加,表明其对底物甘草酸的亲和力和催化效率均得到提高。热稳定性分析表明,PGUS-P-35和PGUS-P-259的热稳定性得到改善,在65℃下保温90 min,其热稳定性相对PGUS-P分别提高了13%和11%。研究表明在蛋白质的合适位点引入糖基修饰对提高蛋白的热稳定性具有促进作用。
采用共滴定法制备了羟基磷灰石/胶原复合粉体,通过凝胶-冷冻干燥法制备了羟基磷灰石/胶原-魔芋葡甘聚糖多孔支架.分析了碱加入量对支架显气孔率、孔径及强度的影响.XRD与TEM结果显示复合粉体中无机相为纳米羟基磷灰石.所制备的支架显气孔率在80%以上,抗压强度在0.45~1.31MPa,SEM结果显示孔径分布在100~300μm.细胞相容性实验证明表明细胞在支架上生长良好.
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